• 楚天生物基因表达定量PCR试剂盒采用SYBR GreenI实时荧光PCR进行定量。产品包含定量PCR引物和 PCR MasterMix, 试剂盒已经优化,可以直接使用。我们提供人和小鼠全基因组3万多个基因的实时荧光定量产品。
  • 产品特点

    引物经过精心设计

    拥有检测基因所有转录本的引物和检测某一转录本的引物。您可按需选择。 --->例子
    引物不含SNP位点,不会因为个体基因多样性而导致定量差别。
    引物不在基因组重复序列。
    专一性得到blast分析的验证,绝大多数引物在目标序列与非目标序列相差3个或以上碱基。
    极大程度避免RNA样品中残余的基因组DNA对体系的影响。
  • 产品经过仔细验证                     查看部分基因的验证数据

    PCR扩增曲线正常。
    DNA熔解曲线呈单峰。
    DNA凝胶电泳大小与设计大小吻合。
    PCR扩增效率高。
  • 图一: 随机选择的88个基因的扩增效率分布图,平均扩增效率为0.968, 标准偏差为0.062.
  • 图二: 一个梯度稀释扩增曲线图
  • SYBR实时荧光PCR定量原理
    SYBR是一种荧光染料。在游离状态下,只有微弱荧光。与双链DNA结合后,荧光强度大大增加(最大吸收波长488nm,最大发射波长522nm)。利用这一特性,SYBR用来检测双链DNA分子的浓度。用于实时荧光PCR,则可实时监控双链DNA量的变化。在PCR过程中,随着循环数的增加,双链DNA分子逐渐增多,荧光信号呈S型逐渐增强。当荧光强度达到设定的阀值(threshold)时, 此时对应的循环数即为Ct值。实时荧光PCR利用Ct值进行定量。
  • 数据分析方法
    本产品采用经典的△△Ct法进行基因表达的相对定量。所谓相对定量,即比较基因在不同生理或实验条件下表达量的变化。按照常规,本产品利用参比基因(通常选择看家基因, housekeeping gene)来校正上样量或实验过程造成的差别。 具体公式为:
    △△Ct = (Ct target-sample - Ct ref-sample ) - (Ct target-control - Ct ref-control)
    Ct target-sample: 样品目标基因Ct值; Ct ref-sample: 样品参比基因Ct值;
    Ct target-control: 对照品目标基因Ct值; Ct ref-control: 对照品参比基因Ct值;
    样品目标基因表达量 / 对照品目标基因表达量 = 2 ^(-△△Ct)

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